麝香草酸濁度試驗

麝香草酸濁度試驗注意事項

TTT是一個很簡單的試驗，但各試驗室間出入往往不小。造成此差異因素很多;首先是雖然同稱為TTT試驗，但各個實驗室在試劑配制，標準曲線繪制或標準管配制方法上并不相同。

(1)國內(nèi)所報告的TTT單位為Shank(襄克)單位。1944年Maclagen(麥克萊根)首先建立TTT試驗，當時以Kingsley(金斯萊)尿蛋白比濁管表示TTT濁度單位(相當于10mg/dl尿蛋白溶液加磺柳酸所顯示的濁度為一個Maclagan單位)。后來，Shank和Hoagland改用BaSO4懸液作為濁度標準，由0.0962mol/LBaCl2加H2SO4所產(chǎn)生的濁度相當于Maclagan所應用的Kingsley標準。但在發(fā)表文章

時，誤印為0.0962NBaCl2，因此測定結(jié)果為麥氏單位的二倍(1個麥氏單位=2個Shank單位)。

(2)血清要新鮮，應早晨空腹抽血。用分光光度計比濁法測定麝濁時，如血內(nèi)脂質(zhì)較多，可用生理鹽水6ml代替緩沖液稀釋血清，作空白管。

(3)麝香草酚-巴比妥緩沖液的pH應在7.50～7.60。pH增高，敏感度降低，可出現(xiàn)假陰性;pH降低，敏感度升高，可出現(xiàn)假陽性。

(4)為了簡化手續(xù)，不少實驗室用100g/L麝香草酚乙醇溶液，直接加入巴比妥緩沖液中，省去結(jié)晶和過濾步驟，但此配方較原法多含1%乙醇，試驗結(jié)果表明比原配方的濁度偏離約20%，絮狀試驗陽性率反而降低。

(5)麝香草酚濁度試驗結(jié)果隨溫度的改變而有所變化。一般是溫度高，濁度低;溫度低，濁度高。為了克服這一誤差，可以從表1上將不同溫度下的濁度結(jié)果換算成25℃的結(jié)果以便于比較。

使用說明：以6u一行為例，在10℃時測定的6u，實際上在25℃時為4.7u。在30℃時測定的6u，在25℃時為7.2u。余類推。

(6)配制硫酸鋇標準比濁管時注意以下幾點：①硫酸試劑的濃度硫酸在反應中雖然是過量的，但當濃度小于0.1mol/L，形成的硫酸鋇濁度低;濃度大于0.1mol/L濁度增高。因此，硫酸試劑須嚴格校正至0.1mol/L。②反應溫度：10℃時形成的硫酸鋇顆粒細，濁度較高，結(jié)果重復性好。25℃、30℃、37℃時形成的顆粒較粗，濁度較低，重復性不易控制。③操作手法：混和方法不同，形成的硫酸鋇顆粒大小不同，結(jié)果相差很大。所以，每次按規(guī)定操作可提高精密度。

(7)麝香草酚緩沖液易變質(zhì)，但如保存于冰箱中，可因結(jié)晶逐漸析出而降低敏感度，故平時使用時，仍應置室溫中，如顯混濁，即不能用。

(8)麝香草酚應為潔白晶體，如帶黃色，須重結(jié)晶處理。可按下法重結(jié)晶精制：取麝香草酚100g，溶于100ml95%乙醇中，以吸濾漏斗過濾。濾液中加入于100ml冷蒸餾水，混勻。靜置20min后吸濾，用冷蒸餾水洗結(jié)晶兩次，可得到潔白的結(jié)晶，置干燥器內(nèi)待完全干燥后使用。

(9)用巴比妥配制的試劑不能久置，超過2周后，TTT結(jié)果有增高趨勢，一個月后明顯偏高。一般認為此試劑不穩(wěn)定與巴比妥有關(guān)，因為久置后，巴比妥試劑的紅外線吸收曲線已有明顯變化。本文所介紹麝香草酚-Tris-HCl緩沖液，具有穩(wěn)定性高，所配TTT試劑放室溫至少可保存3個月，且濁度結(jié)果受室溫變化的影響小。

(10)光電比濁法與光電比色法有所不同，比濁法混濁液除了吸收一部分入射光以外，懸浮的顆粒還能使一部分入射光反射和折射，因此光電池所感受的光除了經(jīng)過吸收以后的出射光外，還有折射的光，后者不是平行光束，混和液和光電池之間距離越大，則折射光的影響越小。所以在采用72型分光光度計比濁時，比色杯的位置應放在比色杯座的遠光電池的一邊，可以提高準確度。

(11)麝香草酚緩沖液中麝香草酚含量是影響結(jié)果的重要因素之一。濁度單位高低和麝香草酚含量成正比，要求使用25℃的麝香草酚飽和溶液。

緩沖液中麝香草酚含量測定法：麝香草酚標準液(1ml含0.1mg)：準確稱取試劑規(guī)格麝香草酚100mg，加水溶解后加水至1L。

取待測麝香草酚緩沖液1ml，用水稀釋至10ml，以后按表2進行測定。

混勻37℃水浴放置15min，750nm比色，以空白管校正吸光度至零，讀取各管吸光度，按下式計算：