三級(jí)甲等綜合醫(yī)院國營
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結(jié)核桿菌抗體檢測試劑盒
結(jié)核病在疾病發(fā)展的不同階段,T淋巴細(xì)胞識(shí)別的結(jié)核抗原不盡相同。目前發(fā)現(xiàn)的診斷結(jié)核特異性抗體最常用的是38kD抗原,抗38kD抗體是涂片陽性結(jié)核患者中抗體陽性率最高的一種,無疑是迄今為止作為單項(xiàng)診斷結(jié)核最好的抗原,是結(jié)核病感染中后期檢測的重要抗原。16kD抗原適于結(jié)核早期感染的患者,可以盡早的檢出活動(dòng)性結(jié)核病。本品采用間接法原理檢測人血清樣本中的38kDa蛋白、16kDa蛋白抗體,用于活動(dòng)性結(jié)核病的臨床輔助診斷。
【原理】斑點(diǎn)反應(yīng)板上固相結(jié)核分枝桿菌Tb-38-16抗原與血清中的結(jié)核分枝桿菌抗體形成復(fù)合物,膠體金標(biāo)記的抗人IgG抗體再與復(fù)合物結(jié)合,形成肉眼可見的紅色圓斑點(diǎn),即為陽性結(jié)果,否則為陰性結(jié)果。
【檢驗(yàn)方法】
1、將待測血清樣本和試劑盒(特別是試劑盒中的試劑A、B)恢復(fù)至室溫(25~37℃);
2、取出反應(yīng)板,于反應(yīng)板孔中滴入試劑A二滴,靜置,待試劑A完全吸入;
3、用加夜器吸取待測血清樣本100微升于反應(yīng)板孔中,靜置,待血清完全吸入;
4、取下反應(yīng)板上的藍(lán)色耳蓋,滴入試劑B三滴,靜置,待試劑B完全吸入;
5、再滴入試劑A二滴,靜置,待試劑A完全吸入,在5分鐘內(nèi)觀察反應(yīng)板孔中現(xiàn)象;
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
檢測結(jié)果為陽性者即為結(jié)核分枝桿菌抗體檢出陽性,陰性者即為結(jié)核分枝桿菌抗體未檢出。
方法:結(jié)核抗原的檢測:用超聲波粉碎的卡介苗(BCG)加PPD,并加福氏完全佐劑先后免疫家兔共6次,歷時(shí)2月余,獲得抗血清。經(jīng)(NH4)2SO4鹽析2次后測蛋白含量。用過碘酸鈉法標(biāo)記辣根過氧化物酶,滴定工作濃度為1∶80。抗體包被濃度為50μg/ml。用雙抗夾心法測CSF中結(jié)核抗原。抗PPD抗體IgG的檢測:包被PPD濃度為10μg/ml,ELISA間接法測抗PPD抗體IgG。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用酶標(biāo)光度儀測492nm吸光度[A,曾稱光密度(OD)]。所有檢測數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后,以A≥0.20為陽性結(jié)果。
腦脊液中結(jié)核抗原和抗純蛋白衍化物(PPD)抗體IgG
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