三級甲等綜合醫(yī)院國營
北京協(xié)和醫(yī)院是集醫(yī)療、教學(xué)、科研于一體的現(xiàn)代化綜合三級甲等醫(yī)院,是國家衛(wèi)生健康委指定的全國疑難重癥診治指導(dǎo)中心,最早承擔(dān)高干保健和外賓醫(yī)療任務(wù)的醫(yī)院之一,也是高等醫(yī)學(xué)教育和住院醫(yī)師規(guī)范化培訓(xùn)國家 級
(1)ELISA法:取一清潔干燥聚丙乙烯微孔反應(yīng)板,標(biāo)明空白、標(biāo)準(zhǔn)和測定,按以下步驟進行:
①空白對照孔加入200μl%正常兔血清,其余孔各加入200μl包被液(內(nèi)含Mb抗體),37℃放置30min,再置4℃過夜,棄去上層液,用洗滌液洗3次,每次放室溫3min。
②空白對照孔加入100μl14%正常人血清;標(biāo)準(zhǔn)孔各加入5、10、20、40、80、160、320ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)Mb溶液(用稀釋液配成)20μl,再加入4%正常人血清,測定孔加入20μl樣品血清,再加入4%正常人血清8μl。每孔各加入100μl酶標(biāo)Mb溶液,置37℃1h,棄去溶液,用洗滌液洗3次。
③每孔各加入200μl底物溶液,37℃15min(避光顯色)。
④每孔加入2mol/LH2SO4以終止反應(yīng),振蕩1min,放置室溫10min,以空白對照孔調(diào)零,在492nm處讀取各孔吸光度。
(2)RIA法:
①取10×75mm塑料試管,零標(biāo)準(zhǔn)管加20g/LBSA液0.1ml,標(biāo)準(zhǔn)管(S1~4)加標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml,測定管加待測血清0.1ml。每管各加抗血清0.1ml,混合后放37℃,水浴中20min。
②每管各加125Ⅰ-Mb液0.1ml,混合,放37℃水浴中20min,再向各管加PR試劑0.5ml,繼續(xù)放37℃水浴中30min。
③離心(3500r/min)15min。棄去上清液,在自動γ免疫計數(shù)器上測放射性。
④以B/B0%為縱坐標(biāo),相對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)Mb濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品管的B/B0%,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品中Mb濃度。
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