三級(jí)甲等綜合醫(yī)院國(guó)營(yíng)
北京協(xié)和醫(yī)院是集醫(yī)療、教學(xué)、科研于一體的現(xiàn)代化綜合三級(jí)甲等醫(yī)院,是國(guó)家衛(wèi)生健康委指定的全國(guó)疑難重癥診治指導(dǎo)中心,最早承擔(dān)高干保健和外賓醫(yī)療任務(wù)的醫(yī)院之一,也是高等醫(yī)學(xué)教育和住院醫(yī)師規(guī)范化培訓(xùn)國(guó)家 級(jí)
取材:血液
乙型肝炎表面抗體的測(cè)定原理:采用純化HBsAg包被反應(yīng)板,加入待測(cè)標(biāo)本,同時(shí)加入HBsAg-HRP,當(dāng)標(biāo)本存在抗-HBS時(shí),該抗-HBS與包被HBsAg結(jié)合并與酶結(jié)合物形成HBsAg-抗HBS-HBsAg-HRP復(fù)合物,加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng),反之則無顯色反應(yīng)。
試劑:0.05mol/L碳酸鹽緩沖液,pH9.6(Na2CO30.16g、NaHCO30.29g,NaN30.02g,加蒸餾水至1000ml,4℃保存);0.05mol/LPBS-Tween20緩沖液,pH7.4(NaCl8g,KH2PO40.2g,NaH2PO4·12H2O2.9g,KCl0.2g,Tween200.5ml,加蒸餾水至1000ml);0.02mol/LTris-HCl-Tween20緩沖液,pH7.4(Tris2.42g,1mol/LHCl3ml,Tween0.5ml,加蒸餾水至1000ml)。抗HBs·IgG(包被用),辣根過氧化酶標(biāo)記抗HBs(抗HBs·HRP)和底物(鄰苯二胺)隨藥盒配備或自購(gòu)。
操作方法:
(1)取用碳酸鹽緩沖液作適當(dāng)稀釋的抗HBs·IgG(用抗HBs血清自提或隨藥盒配備)包被聚苯乙烯反應(yīng)板,每孔加0.1ml(最后1孔不加,作為空白)。加蓋,放4℃24h。次日用Tris-HCl-Tween20緩沖液洗滌3次,最后將板倒置于吸水紙上,使各孔液體流盡。
(2)各孔加入待測(cè)血清0.1ml(觀察滴度可作不同稀釋)。每板同時(shí)做陽(yáng)性血清和陰性血清對(duì)照。加蓋,置37℃2h后移去各孔液體,如上法洗滌3次。
(3)各孔加入底物溶液(0.1mol/LNa2HPO45.14ml,0.05mol/L枸櫞酸4.86ml,鄰苯二胺4mg,3%H2O20.05ml,避光,臨用時(shí)配制)0.1ml,置室溫暗處15~30min。待陽(yáng)性對(duì)照孔充分顯色后,各孔加入2mol/LH2SO40.05ml終止反應(yīng)。
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